Aranza Novelo Góngora
Ingeniera Bioquímica
Informe de Residencia Profesional
Resumen:
Este proyecto surge por la preocupación acerca de
una de las enfermedades causadas por virus que hoy en día se encuentra muy
presente en cerca de 80 países, pero principalmente los casos se presentan en
las zonas tropicales/sub-tropicales, como es el caso de la península de Yucatán,
para encontrar posibles métodos para combatirlo y entenderlo, en particular
pretende determinar si existe una relación entre las cantidades de proteínas
antivirales producidas en células en condiciones normales y las células
infectadas con el virus dengue, para buscar herramientas que puedan servir de
apoyo contra la enfermedad La infección por virus Dengue (DENV) es una de las
enfermedades transmitidas por el mosquito hembra Aedes aegypti más prevalente en regiones tropicales y subtropicales
del mundo para la cual no existe tratamiento ni vacuna debido en parte a la
falta de conocimiento sobre su fisiopatogenia. Algunos factores como la
inhibición de la activación de la proteína antiviral PKR ha sido reportado in
Vitro como un mecanismo que emplean estos virus en la infección. Sin embargo,
no se ha establecido de manera contundente, si la interferencia de los DENV con
la actividad antiviral de la PKR está relacionada con la evolución clínica de
los pacientes con dengue. Por lo tanto, es importante conocer si la modulación
de la actividad de la PKR está relacionada con la evolución del dengue, lo cual
tiene implicaciones en el diseño y el desarrollo de vacunas y antivirales
eficaces. El objetivo general de este proyecto fue analizar los niveles de la
proteína PKR en células in vitro para
el estudio de la patología del dengue. Asimismo, extraer proteínas de células
In vitro A549, cuantificar las proteínas extraídas, detectar la proteína PKR en
células A549 por el método de Western blot, detectarla proteína PKR en células
mononucleares de sangre periférica (PBMCs) por Western Blot. Se logró el
objetivo de este trabajo, por el método indirecto, este resultado pudo ser
debido a diversos motivos, el principal podría ser la inhibición de la enzima peroxidasa,
dado que el anticuerpo primario contra PKR contiene entre sus conservadores azida
de sodio, la cual inactiva a la enzima HRP, compuesto que no se encuentra en el
anticuerpo anti GAPDH-HRP usado en el método directo y que sirve de guía para
verificar la eficacia de la técnica, y con el cual si se detectó una banda del
peso molecular esperado para la proteína constitutiva GAPDH. Otro posible
motivo por el cual no se pudo determinar la presencia de la proteína PKR es que
estuvieran degradadas por el congelamiento-descongelamiento de las mismas
durante la preparación de las muestras para las pruebas, pero al expresarse las
bandas de la GAPDH con el método directo, se eliminó esa hipótesis.
Asesor: Dr. Luis Fernando Cuevas Glory
Revisores: Dra.Elizabeth de la Luz Ortiz Vázquez
Ing.
Herbert B. Loría Sunza
Dra. María de Lourdes Vargas y Vargas
Para citar:
Novelo
Góngora, A. (2016) Detección de la proteína PKR en células in vitro [CD-ROM Informe de Residencia Profesional.
Instituto Tecnológico de Mérida. Mérida, Yucatán, México. Publicada 26 de mayo de 2016.