Detección de la proteína PKR en células in vitro

Celebramos la titulación de la nueva colega…

Aranza Novelo Góngora

Ingeniera Bioquímica

“Detección de la proteína PKR en células in vitro”

Informe de Residencia Profesional

Resumen:

Este proyecto surge por la preocupación acerca de una de las enfermedades causadas por virus que hoy en día se encuentra muy presente en cerca de 80 países, pero principalmente los casos se presentan en las zonas tropicales/sub-tropicales, como es el caso de la península de Yucatán, para encontrar posibles métodos para combatirlo y entenderlo, en particular pretende determinar si existe una relación entre las cantidades de proteínas antivirales producidas en células en condiciones normales y las células infectadas con el virus dengue, para buscar herramientas que puedan servir de apoyo contra la enfermedad La infección por virus Dengue (DENV) es una de las enfermedades transmitidas por el mosquito hembra Aedes aegypti más prevalente en regiones tropicales y subtropicales del mundo para la cual no existe tratamiento ni vacuna debido en parte a la falta de conocimiento sobre su fisiopatogenia. Algunos factores como la inhibición de la activación de la proteína antiviral PKR ha sido reportado in Vitro como un mecanismo que emplean estos virus en la infección. Sin embargo, no se ha establecido de manera contundente, si la interferencia de los DENV con la actividad antiviral de la PKR está relacionada con la evolución clínica de los pacientes con dengue. Por lo tanto, es importante conocer si la modulación de la actividad de la PKR está relacionada con la evolución del dengue, lo cual tiene implicaciones en el diseño y el desarrollo de vacunas y antivirales eficaces. El objetivo general de este proyecto fue analizar los niveles de la proteína PKR en células in vitro para el estudio de la patología del dengue. Asimismo, extraer proteínas de células In vitro A549, cuantificar las proteínas extraídas, detectar la proteína PKR en células A549 por el método de Western blot, detectarla proteína PKR en células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) por Western Blot. Se logró el objetivo de este trabajo, por el método indirecto, este resultado pudo ser debido a diversos motivos, el principal podría ser la inhibición de la enzima peroxidasa, dado que el anticuerpo primario contra PKR contiene entre sus conservadores azida de sodio, la cual inactiva a la enzima HRP, compuesto que no se encuentra en el anticuerpo anti GAPDH-HRP usado en el método directo y que sirve de guía para verificar la eficacia de la técnica, y con el cual si se detectó una banda del peso molecular esperado para la proteína constitutiva GAPDH. Otro posible motivo por el cual no se pudo determinar la presencia de la proteína PKR es que estuvieran degradadas por el congelamiento-descongelamiento de las mismas durante la preparación de las muestras para las pruebas, pero al expresarse las bandas de la GAPDH con el método directo, se eliminó esa hipótesis.

Asesor: Dr. Luis Fernando Cuevas Glory

Revisores: Dra.Elizabeth de la Luz Ortiz Vázquez

                    Ing. Herbert B. Loría Sunza

                    Dra. María de Lourdes Vargas y Vargas

Para citar:

Novelo Góngora, A. (2016) Detección de la proteína PKR en células in vitro [CD-ROM Informe de Residencia Profesional. Instituto Tecnológico de Mérida. Mérida, Yucatán, México.  Publicada 26 de mayo de 2016.